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Angew:復(fù)旦劉倩、張?jiān)葡鑸F(tuán)隊(duì)發(fā)展了一種通用的光激活標(biāo)簽的策略,并將其應(yīng)于超分辨成像

來(lái)源:復(fù)旦大學(xué)化學(xué)系      2022-10-09
導(dǎo)讀:近日,復(fù)旦大學(xué)單分子成像課題組(SMILE)為了實(shí)現(xiàn)生物相容性好的長(zhǎng)波長(zhǎng)可見(jiàn)光活化,報(bào)道了一種通用的標(biāo)簽策略,在熒光分子上引入一個(gè)通用光籠基團(tuán)2,3-二氫-1,4-氧硫雜環(huán)己二烯(SO)。研究成果以“A Universal Photoactivatable Tag Attached to Fluorophores Enables Their Use for Single-Molecule Imaging”為題在線(xiàn)發(fā)表于期刊Angew. Chem. Int. Ed.上。復(fù)旦大學(xué)化學(xué)系劉倩青年研究員和張?jiān)葡枨嗄暄芯繂T為共同通訊作者。
超分辨成像方法打破了傳統(tǒng)的光衍射極限,實(shí)現(xiàn)200 nm以下的分辨率。基于光激活的單分子定位顯微成像是超分辨熒光成像的一種,利用單個(gè)分子的光開(kāi)關(guān)性質(zhì),每張采集的圖像區(qū)域內(nèi)只有小部分熒光分子處于熒光態(tài),大多數(shù)熒光分子處于暗態(tài),通過(guò)提取每張圖像單分子定位信息,將數(shù)千張圖像重組成一張超分辨圖像,使它成為研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的有力工具?;趩畏肿佣ㄎ怀直娉上裥枰饪烧{(diào)熒光分子,為開(kāi)發(fā)光激活探針通常是引入可光裂解或光轉(zhuǎn)化的光籠基團(tuán),從而實(shí)現(xiàn)熒光分子的光物理性質(zhì)改變進(jìn)而淬滅熒光,然后在特定激光激發(fā)下使光籠基團(tuán)分解或離去而恢復(fù)熒光態(tài)。這一過(guò)程通常需要兩束光,高功率的紫外光活化以及低功率的可見(jiàn)光激發(fā)。這兩束光需要在時(shí)間和空間上同步,此外紫外光對(duì)生物樣品有明顯的光毒性。

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為了實(shí)現(xiàn)生物相容性好的長(zhǎng)波長(zhǎng)可見(jiàn)光活化,團(tuán)隊(duì)報(bào)道了一種通用的標(biāo)簽策略,在熒光分子上引入一個(gè)通用光籠基團(tuán)2,3-二氫-1,4-氧硫雜環(huán)己二烯(SO)。SO基團(tuán)主要通過(guò)光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(PeT)淬滅熒光團(tuán),在激發(fā)光的照射下淬滅的熒光團(tuán)可以被激活,熒光得到釋放。這類(lèi)探針光活化激發(fā)光波長(zhǎng)與它們的吸收重疊,不需要對(duì)細(xì)胞光毒性較大的紫外光活化。在正常有氧環(huán)境中,激發(fā)光照射染料產(chǎn)生少量單線(xiàn)態(tài)氧,將SO基團(tuán)氧化為酯的衍生物,終止了PeT過(guò)程,熒光得以恢復(fù),從而實(shí)現(xiàn)可見(jiàn)光活化。通過(guò)系統(tǒng)的光譜測(cè)定和單分子成像實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其光激活特性。這一方法適用于不同骨架結(jié)構(gòu)的商用熒光探針,包括香豆素、氟化硼二吡咯、羅丹明和花菁類(lèi)染料。此外,團(tuán)隊(duì)成功地將這些光激活探針用于活細(xì)胞器的超分辨率示蹤和神經(jīng)元微管的超分辨成像??紤]到這一策略的通用性,團(tuán)隊(duì)認(rèn)為可以基于該SO標(biāo)簽開(kāi)發(fā)更多的光激活探針,并可以利用這些光激活熒光團(tuán)探索更多生物過(guò)程。
上述研究成果以“A Universal Photoactivatable Tag Attached to Fluorophores Enables Their Use for Single-Molecule Imaging”為題在線(xiàn)發(fā)表于期刊Angew. Chem. Int. Ed.上。復(fù)旦大學(xué)化學(xué)系劉倩青年研究員和張?jiān)葡枨嗄暄芯繂T為共同通訊作者,復(fù)旦大學(xué)為唯一完成單位。該項(xiàng)研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金、上海市科委等項(xiàng)目的大力支持。
參考資料:https://mp.weixin.qq.com/s/KiQJiNHZrx-vQO4rg70UdA

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