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ACS Catalysis:北理工李春教授課題組實(shí)現(xiàn)四種稀有甘草三萜化合物的特異性合成

來(lái)源:北京理工大學(xué)      2020-03-31
導(dǎo)讀:近日,北京理工大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院生化工程系/合成生物系統(tǒng)研究所李春教授課題組以來(lái)源于植物的P450單加氧酶CYP72A63為研究對(duì)象,利用同源建模和分子對(duì)接等技術(shù),確定了決定其催化特性的關(guān)鍵氨基酸殘基,并利用釀酒酵母對(duì)突變體功能進(jìn)行了驗(yàn)證,實(shí)現(xiàn)了四種稀有甘草三萜化合物的特異性合成,為實(shí)現(xiàn)植物天然產(chǎn)物的微生物特異性合成提供了新思路和新方法。

近日,北京理工大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院生化工程系/合成生物系統(tǒng)研究所李春教授課題組以來(lái)源于植物的P450單加氧酶CYP72A63為研究對(duì)象,利用同源建模和分子對(duì)接等技術(shù),確定了決定其催化特性的關(guān)鍵氨基酸殘基,并利用釀酒酵母對(duì)突變體功能進(jìn)行了驗(yàn)證,實(shí)現(xiàn)了四種稀有甘草三萜化合物的特異性合成,為實(shí)現(xiàn)植物天然產(chǎn)物的微生物特異性合成提供了新思路和新方法。該研究成果以 《Controlling Chemo- and Regio-selectivity of a Plant P450 in Yeast Cell toward Rare Licorice Triterpenoid Biosynthesis》為題發(fā)表在催化類(lèi)頂級(jí)國(guó)際期刊《ACS Catalysis》(《美國(guó)化學(xué)會(huì)-催化》,IF="12.221)上。本文的共同通訊作者為化學(xué)與化工學(xué)院的李春教授、王穎預(yù)聘副教授和于洋預(yù)聘副教授,第一作者為北京理工大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院博士生孫文濤。

  中藥方劑中的十方九草中的“草”指的就是傳統(tǒng)中藥甘草,又稱(chēng)國(guó)老,具有清熱解毒之功效又用以調(diào)和諸藥。其中,甘草三萜是甘草的主要活性成分,如甘草酸及其衍生物等具有抗病毒、抗腫瘤、抗炎癥等多種生理活性同時(shí)又不抑制人體免疫系統(tǒng),是肝臟炎癥治療中的抗炎癥藥物代表。當(dāng)前,在湖北抗擊新冠肺炎治療中使用的甘草酸二胺組合維生素C發(fā)揮了積極作用。李春教授課題組前期開(kāi)創(chuàng)性地利用微生物合成植物甘草中主要三萜類(lèi)化合物的系列研究(單葡萄醛酸基甘草次酸Chem Eng Sci 2014;β-香樹(shù)脂醇AIChE Journal 2015;角鯊烯Chem Eng Sci 2016A和2016B;α-香樹(shù)脂醇ACS Synthetic Biology 2018;甘草次酸Metabolic Engineering 2018;催化關(guān)鍵酶J Biological Chem 2018和J Physical Chem Lett 2018;甘草次酸衍生物J Agric Food Chem 2019和Critical Rev in Biotechnol 2019;甘草稀有三萜ACS Catalysis 2020),有望解決目前挖根提酸、破壞植被與生態(tài)的不可持續(xù)的獲取方式(研究過(guò)程見(jiàn)下圖)。然而,甘草中還存在一些含量極低、具有重要生理功能的稀有三萜化合物包括甘草次醇、甘草次醛以及甘草次醇的同分異構(gòu)體等。它們除了具有重要的生理活性外,這些稀有三萜分子骨架上的羥基、醛基等功能基團(tuán)的存在為對(duì)其進(jìn)一步修飾,從而獲得結(jié)構(gòu)更加多樣、功能更加豐富的新型衍生物提供了可能。但這些稀有三萜在甘草根中含量極低以及復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu),導(dǎo)致這類(lèi)化合物難以直接提取或化學(xué)合成制備。

  本文利用甘草中合成甘草次酸的P450單加氧酶CYP72A63基于同源建模與分子對(duì)接等技術(shù)進(jìn)行輔助理性設(shè)計(jì),重塑其活性口袋以控制對(duì)于不同中間產(chǎn)物的契合度。通過(guò)提高甘草次醇的契合度實(shí)現(xiàn)了甘草次酸特異性合成,通過(guò)降低甘草次醇的契合度防止了其進(jìn)一步氧化實(shí)現(xiàn)了甘草次醇的特異性合成。通過(guò)控制C-29和C-30相對(duì)于血紅素鐵的相對(duì)位置,實(shí)現(xiàn)了對(duì)底物C-29的特異性氧化,進(jìn)一步通過(guò)CPR的匹配優(yōu)化首次實(shí)現(xiàn)了甘草次醛類(lèi)中間產(chǎn)物的特異性合成。同時(shí)利用釀酒酵母的體內(nèi)驗(yàn)證方式解決了突變體體外試驗(yàn)難以進(jìn)行的問(wèn)題。

  論文詳情:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acscatal.0c00128


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